Equipo de diagnóstico ácido nucléico nuevo de Coronavirus (2019-nCoV)
(Investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia)
Uso previsto
El equipo de diagnóstico ácido nucléico de Coronavirus de la novela (2019-nCoV) (investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia) se utiliza para la detección cualitativa de los genes de ORF1ab y de N del coronavirus nuevo (2019-nCoV) en esponja nasofaríngea, esponja orofaríngea, líquido de lavado alveolar, esputo, suero, sangre entera y las heces de casos sospechosos de la pulmonía con la infección nueva del coronavirus, los pacientes con los racimos sospechosos de infección nueva del coronavirus, y otros pacientes que requieren diagnosis o diagnosis diferenciada de la infección nueva del coronavirus.
Para el uso de diagnóstico in vitro solamente. Para para uso profesional solamente.
Principio de la prueba
Aplicando tecnología cuantitativa de la fluorescencia en tiempo real RT-PCR en el instrumento cuantitativo de la polimerización en cadena de la fluorescencia, esta prueba utiliza el coronavirus nuevo (2019-nCoV) ORF1ab y la secuencia conservada específica de cifrar el gen de la proteína N del nucleocapsid como las regiones de la blanco que se diseñan para la secuencia conservada de los genes de la doble-blanco, para alcanzar la detección de ARN de la muestra a través de cambios fluorescentes de la señal.
Las aplicaciones de sistema de detección de la polimerización en cadena el control interno positivo, que supervisa la presencia de inhibidores de la polimerización en cadena en especímenes de la prueba detectando si la señal de control interna es normal, de evitar un resultado del falso negativo.
Componentes del equipo de diagnóstico
Este equipo es un reactivo de la reacción de la amplificación y contiene los componentes siguientes:
| No. |
Nombre el reactivo |
Espec. Y Qty |
Ingredientes principales |
| 24 T |
48 T |
| 1 |
mezcla 2019-nCov-PCR |
624µL/tube x 1 |
1248µL/tube x 1 |
Primeros ministros (4,62%), puntas de prueba (1,15%), dNTPs (3,85%), MgCl2 (0,77%), Rnasin (0,48%), almacenador intermediario de la polimerización en cadena (89,13%) |
| 2 |
mezcla 2019-nCov-PCR-Enzyme |
96µL/tube x 1 |
192µL/tube x 1 |
Enzima del RT (62,5%),
Enzima de Taq (37,5%)
|
| 3 |
control 2019-nCov-PCR-Positive |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
ARN transcriptivo in vitro que contiene los genes de la blanco (gen de ORF1 ab, de N) y los fragmentos estándar internos del gen (ARNasa P) |
| 4 |
control 2019-nCov-PCR-Negative |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Salino normal |
Método de prueba
Preparación del reactivo (realizado en “la región de la preparación el reactivo ")
Saque cada componente del equipo de diagnóstico y coloqúelos en la temperatura ambiente. Permita que los reactivo equilibren en la temperatura ambiente, después el vórtice cada uno de ellos respectivamente para su uso posterior.
Según la cantidad de especímenes de la prueba, el control 2019-nCoV-PCR-Positive y el control 2019-nCoV-PCR-Negative, la cantidad apropiada de la pipeta de la mezcla 2019-nCoV-PCR y la mezcla 2019-nCoV-PCR-Enzyme (mezcla 2019-nCoV-PCR la mezcla 4μL/test de la Polimerización en cadena-enzima 26μL/test + 2019-nCoV-), los mezclan a fondo para hacer una polimerización en cadena-Mastermix, la centrifugan instantáneamente para su uso posterior.
| Artículo |
1 muestra |
10 muestras |
24 muestras |
48 muestras |
| mezcla 2019-nCoV-PCR (μL) |
26 |
260 |
624 |
1248 |
| mezcla 2019-nCoV-PCR-Enzyme (μL) |
4 |
40 |
96 |
192 |
| Nota: La configuración antedicha está apenas para su referencia y asegurar bastante volumen de la polimerización en cadena-Mastermix, más volumen de medir con una pipeta real puede ser requerido. |
Transfiera los reactivo sobre-preparados al “espécimen que procesa la región” para su uso posterior.
Amplificación de la polimerización en cadena (refiera al manual del usuario de cada instrumento para ajustar los ajustes.)
Tubos de la reacción de la polimerización en cadena del lugar en los pozos del espécimen del equipo de la amplificación. Ponga el control 2019-nCoV-PCR-Positive, el control 2019-nCoV-PCR-Negative y los especímenes que se probarán en el nombre correspondiente del espécimen de la secuencia y de la entrada.
Canal de prueba selecto de la polimerización en cadena:
a. canales selectos de FAM (región de ORF-1ab) y de ROX (gen de N) para probar el ácido nucléico 2019-nCoV.
b. canal selecto del HEX. para probar control interno.
Fije los parámetros del ciclo
| No. |
Pasos |
Temperatura |
Tiempo |
Ciclo no. |
| 1 |
Transcripción reversa |
50°C |
30 mínimos. |
1 |
| 2 |
predenaturation del cDNA |
95°C |
1 mínimo. |
1 |
| 3 |
Desnaturalización |
95°C |
sec 15. |
45 |
| Colección del recocido, de la extensión y de la fluorescencia |
60°C |
30 sec.* |
| 4 |
Enfriamiento del dispositivo |
25°C |
sec 10. |
1 |
Cuando se terminan los ajustes, ahorre los ajustes y realice el procedimiento de la reacción.
Análisis del resultado (refiera al manual del usuario del instrumento para ajustar los ajustes.)
Los resultados serán ahorrados automáticamente cuando se terminan las reacciones. Analice la curva de la amplificación de la blanco de la detección y del control interno. Ajuste los valores del comienzo, del final y de umbral de la línea de fondo del gráfico según resultado del análisis (los usuarios pueden ajustar los valores según la situación real. El valor del comienzo se puede fijar entre 3-15, y el valor del final entre 5-20. Ajuste la curva de la amplificación del control negativo para ser plano o debajo del umbral). Haga clic “para analizar” para ejecutar el análisis, asegúrese de cada parámetro para satisfacer los requisitos dados en “el control de calidad 5.”. Vaya a la ventana de la “placa” a registrar resultados cualitativos.
Control de calidad
| Artículo |
control 2019-nCoV-PCR-Negative |
control 2019-nCoV-PCR-Positive |
| Valor del CT |
Ningún Ct o Ct > 40 en el canal FAM, ROX y HEX.
(Control interno)
|
≤ 35 en el canal FAM, ROX y HEX.
(Control interno)
|
El resultado de la prueba se trata como válido si todas las condiciones en el antedicho se cumplen para la misma prueba. Si no el resultado de la prueba se trata como inválido y necesita ser reexaminado.
Gama de referencia
Con la investigación sobre valores de referencia, el valor de referencia del Ct del gen de la blanco se determina para ser 40, el valor de referencia del CT del control interno se determina ser 40.
Explicación del resultado de la detección
| Conclusión |
Resultados de la amplificación |
| positivo 2019-nCoV |
Hay curva típica de la amplificación de la S-forma detectada en el canal de FAM y/o de ROX, y la curva que se detecta en el canal del HEX., Ct≤40 de la amplificación. |
| negativa 2019-nCoV |
No hay curva típica de la amplificación de la S-forma (ningún Ct) o Ct > 40 detectados en el canal de FAM y de ROX, y la curva que se detecta en el canal del HEX., ≤ 40 de la amplificación del Ct. |
No hay curva típica de la amplificación de la S-forma detectada en el canal de FAM, de ROX y del HEX. (ningún Ct), o el Ct > 40. Se indica que la concentración del espécimen es demasiado baja, o hay las sustancias de interferencia que inhiben la reacción. El resultado de la prueba es inválido. Una investigación se debe realizar para descubrir y para excluir las razones, recoge por favor el espécimen otra vez y reexamina los especímenes.
Nota: Para las culturas del virus, no hay requisitos para los resultados de la prueba internos de control.
Índice del funcionamiento de producto
Exactitud
La referencia positiva de la empresa de la prueba, los resultados es todos positiva.
Especificidad
Para el equipo de diagnóstico ácido nucléico nuevo de Coronavirus (2019-nCoV) (investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia), no hay tampoco reacción cruzado con el coronavirus (NL63, HKU1, 229E, OC43), coronavirus del SARS, coronavirus de MERS, gripe un virus, tipo Yamagata del virus de la gripe B y tipo Victoria, virus de la gripe A (H1N1), virus de la gripe A (H3N2), virus de la gripe A (H5N1), virus de la gripe A (H7N9), el tipo sincitial respiratorio A del virus y el tipo B, el tipo nasal A del virus, el tipo B y el tipo C, el tipo 1 del adenovirus, 2, 3, 4, 5, 7 y 55, el tipo 1 del virus de parainfluenza, 2 y 3, tipo intestinal A del virus, tipo B, tipo C (EV-C95), tipo D (EV-D70), virus pulmonar parcial, virus humano del pulmón, neoformans del criptococo, estreptococo piógeno, baumannii de la acinetobacteria, carinii de los pneumocystis, pneumoniae de la Klebsiella, estreptococo pneumoniae, Hemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, pneumophilia del legionella, bordetella pertussis, estafilococo áureo, pulmonía de los pneumoniae del micoplasma, estreptococo pneumoniae, pneumoniae de la Klebsiella, chlamydia, virus del EB, virus humano del cytomegalo, fumigatus del aspergillus, albicans de la candida, glabrata de la candida, tuberculosis de micobacteria, micobacteria no-tuberculosa, norovirus, rotavirus, virus del zoster de la varicela, virus de sarampión, virus de paperas, muestras positivas humanas de la DNA etc. del genoma. Pruebe la referencia negativa de la empresa, el resultado son todo negativo.
Precisión:
El coeficiente de variación (el CV%) del valor del CT de la precisión del dentro-funcionamiento es el ≤5%.
La evaluación clínica se basa en recomienda método “de guía nueva de la tecnología de la prueba de laboratorio de la pulmonía de la infección de Coronavirus”, “el programa de supervisión nuevo de los casos de la pulmonía de la infección de Coronavirus (segunda edición)” a la diagnosis/al resultado de la exclusión como comparación, en el Cademy militar del instituto de investigación médica militar, control de enfermedades de Hunan y centro de la prevención, el hospital de la gente de la provincia de Hunán, hospital central de Xiangya de la universidad del sur 2do, según los datos clínicos recogidos de las cuatro instituciones, tales como análisis estadístico, la evaluación preliminar, clínico básico confirmó el funcionamiento de producto puede cubrir las necesidades de la emergencia. Los tipos de muestras para la evaluación clínica incluyeron las esponjas faríngeas y el lavado alveolar. Otros datos clínicos serán recogidos después de comercializar para confirmar el funcionamiento clínico del producto.
Debido a las características de la esponja y del otro proceso sí mismo, resultados del proceso de la colección de la muestra y viral de la infección del falso negativo se puede causar por el volumen de muestra escaso, que se debe combinar con la otra diagnosis e información clínicas del tratamiento para el juicio completo, la contra-prueba cuando sea necesario.
Almacenamiento y estabilidad
El equipo de diagnóstico se debe almacenar en una bolsa sellada at-20±5°C y proteger contra luz. El equipo es provisional válido por 6 meses.
Refiera por favor a la fecha de la fecha de la fabricación y de vencimiento en el paquete externo.
Los reactivo mantienen válido y estable dentro de la fecha de vencimiento si no utilizó. Mientras el envase del reactivo se abra, el helada/los ciclos del deshielo no debe exceder de tres.
Instrumento compatible
El equipo de diagnóstico es aplicable a SLAN-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, instrumentode lapolimerización en cadenaMA-6000.
¡Su mensaje debe tener entre 20 y 3.000 caracteres!
