Investigación ácida nucléica nueva de la Polimerización en cadena-fluorescencia del equipo de la detección de COVID-19 Coronavirus (2019-NCoV)
Equipo de diagnóstico ácido nucléico nuevo de Coronavirus (2019-nCoV)
(Investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia)
Uso previsto
El equipo de diagnóstico ácido nucléico de Coronavirus de la novela (2019-nCoV) (investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia) se utiliza para la detección cualitativa de los genes de ORF1ab y de N del coronavirus nuevo (2019-nCoV) en esponja nasofaríngea, esponja orofaríngea, líquido de lavado alveolar, esputo, suero, sangre entera y las heces de casos sospechosos de la pulmonía con la infección nueva del coronavirus, los pacientes con los racimos sospechosos de infección nueva del coronavirus, y otros pacientes que requieren diagnosis o diagnosis diferenciada de la infección nueva del coronavirus.
Para el uso de diagnóstico in vitro solamente. Para para uso profesional solamente.
Resumen
Las definiciones de “casos sospechosos” y “sospecharon que los racimos de pacientes” serán definidos refiriendo a la “diagnosis de la pulmonía y al programa de tratamiento para la infección nueva de Coronavirus” y “al programa de supervisión del caso de la pulmonía para la infección nueva de Coronavirus” publicada por CDC de China (el currentversion).
Coronavirus nuevo que (2019-nCoV) el equipo de diagnóstico ácido nucléico (investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia) se utiliza solamente para la diagnosis auxiliar de casos relacionados y la reserva de la emergencia para la diagnosis in vitro durante el brote de la pulmonía de infección nueva de Coronavirus (2019-nCoV) desde December2019, este equipo no debe ser utilizado como diagnóstico in vitro rutinario en práctica clínica. Siga por favor los requisitos relevantes de la “diagnosis de la pulmonía y del programa de tratamiento para la infección nueva de Coronavirus”, la “prevención de la pulmonía y el programa de control para la infección nueva de Coronavirus” y otros documentos funcionando.
Las pruebas ácidas nucléicas nuevas de Coronavirus deben cumplir con las “instrucciones técnicas para el prueba de laboratorio de Coronavirus nuevo en la CDC de China” y guardar buena seguridad biológica.
Principio de la prueba
Aplicando tecnología cuantitativa de la fluorescencia en tiempo real RT-PCR en el instrumento cuantitativo de la polimerización en cadena de la fluorescencia, esta prueba utiliza el coronavirus nuevo (2019-nCoV) ORF1ab y la secuencia conservada específica de cifrar el gen de la proteína N del nucleocapsid como las regiones de la blanco que se diseñan para la secuencia conservada de los genes de la doble-blanco, para alcanzar la detección de ARN de la muestra a través de cambios fluorescentes de la señal.
Las aplicaciones de sistema de detección de la polimerización en cadena el control interno positivo, que supervisa la presencia de inhibidores de la polimerización en cadena en especímenes de la prueba detectando si la señal de control interna es normal, de evitar un resultado del falso negativo.
Componentes del equipo de diagnóstico
Este equipo es un reactivo de la reacción de la amplificación y contiene los componentes siguientes:
Nota:
1. No mezcle ni intercambie los componentes de diversas porciones del equipo.
2. Todas las muestras biológicas en el equipo de diagnóstico se han desactivado.
3. Materiales requeridos pero no proporcionados: 1.5ml ADNasa-libre y tubos de centrífuga ARNasa-libres, tubos de la reacción de la polimerización en cadena 0.2ml, extremidades de la pipeta (se prefieren 10μL, las extremidades 200μL and1000μL con los filtros), centrifugadora de escritorio, diversos modelos del mezclador de escritorio del vórtice de los armas de la pipeta.
4. reactivo Uno mismo-preparado: Reactivo del lanzamiento de la muestra (número de referencia: S1014E) o reactivo de la liberación de la muestra (número de referencia: S1015E extracción) o del ácido nucléico (DNA/RNA) o equipo de la purificación (método magnético) de las gotas (número de referencia: S1002E) manufacturado por el ARN viral Mini Kit (50) de Sansure Biotech Inc. o de QIAamp manufacturado por QIAGEN. Reactivo del almacenamiento de la muestra, tal como reactivo del almacenamiento de la muestra (número de referencia: X1002E) manufacturado por Sansure Biotech Inc.
Instrumento compatible
El equipo de diagnóstico es aplicable a SLAN-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, instrumentode lapolimerización en cadenaMA-6000.
Requisitos del espécimen
1. Tipo aplicable del espécimen: esponja nasofaríngea, esponja orofaríngea, líquido de lavado alveolar, esputo, suero, sangre entera y heces.
2. Colección de espécimen
Esponja nasofaríngea/esponja orofaríngea: Recoja la muestra de acuerdo con las disposiciones relevantes " del método de colección de espécimen” en “la guía técnica del laboratorio de la pulmonía para la infección nueva de Coronavirus” de la “prevención de la pulmonía y del plan del control para la infección nueva de Coronavirus”. Se prueba que la esponja hizo de la cabeza de muestreo de nylon y barra del muestreo del ABS se puede seleccionar para la colección de la muestra.
Esponja nasofaríngea:
El tubo de la colección de espécimen se debe pegar con el código de barras primero, la esponja nasofaríngea debe ser within3 recogido los días después del inicio de la enfermedad lo más lejos posible. Utilice la esponja para medir la longitud entre el nasi del ápice y lóbulo, después marca con el finger. Inserte la esponja en la cavidad nasal en la dirección del perpendicular a la nariz (cara). La esponja se debe insertar por lo menos a medias de la longitud del lóbulo al nasi del ápice. Haga las paradas de la esponja en el for15 nasal ~ 30 s, suavemente rotate3 ~ 5 veces, ponen rápidamente la esponja en el almacenador intermediario de la lisis del tubo cotaining2 ml de la colección de espécimen (lo mismo que almacenador intermediario de la lisis en el reactivo del lanzamiento de la muestra) o muestrean el reactivo del almacenamiento que contiene el inhibidor enzimático del ARN. Inserte la esponja, después rompa la barra estéril de la esponja cerca del top, apretar el casquillo del tubo y el sello con la película del lacre.
Esponja orofaríngea:
El tubo de la colección de espécimen se debe pegar con el código de barras primero, la esponja orofaríngea se debe recoger en el plazo de 3 días después del inicio de la enfermedad lo más lejos posible. Una esponja de congregación estéril se debe utilizar para el muestreo, limpia moderado la pared faríngea posterior, evita tocar la lengua. Rápidamente lugar una esponja estéril en el tubo de la colección usado para la colección de esponja orofaríngea. Rompa la barra estéril de la esponja cerca del top, apriete el casquillo del tubo y el sello con la película del lacre.
Líquido de lavado alveolar:
Pacientes severos o pacientes con la pulmonía que progreso rápidamente. Clínico extract≥5ml BALF en un envase aséptico 50ml etiquetado con el código de barras y el tapón de tuerca de la muestra por la operación aséptica. Recoja el espécimen, después apriete el casquillo del tubo y el sello con la película del lacre.
Esputo:
El tubo de la colección de espécimen se debe pegar con el código de barras primero. No abra la vía aérea para recoger especímenes al recoger el esputo. Esputo de la tos de Collect.deep en una taza de muestreo aséptica disponible con el tapón de tuerca, carga proteasa K de 2 ml (1g/L) en el muestreo de la taza. Recoja el esputo, después apriete el casquillo del tubo y el sello con la película del lacre. Envíe a la detección en el plazo del minuto 30 lo más lejos posible. La proteasa K no debe ser añadida primero si los especímenes necesitan ser transportados sobre distancias largas.
Sangre entera:
Las muestras de sangre se pueden recoger en el plazo de 7 días después del inicio o los pacientes críticos, o los pacientes considerados con viremia. El tubo de la colección de espécimen se debe pegar con el código de barras primero. Recoja 2~4ml de muestras de sangre en el tubo de la colección de la sangre del vacío que contiene el anticoagulante del EDTA.
Heces:
Para los pacientes con síntomas gastrointestinales tales como diarrea en el primero tiempo de la enfermedad, heces del coto 3~5g (tamaño de la soja). El tubo de la colección de espécimen se debe pegar con el código de barras primero. Recoja la muestra en el tubo de la colección de espécimen con el tapón de tuerca que contiene (el inhibidor enzimático del ARN puede ser añadido cuando las condiciones permiten) entonces el sello salino normal 2ml con la película del lacre.
Después de la colección de la muestra, se recomienda para colocar en el reactivo del almacenamiento de la muestra para la preservación.
Se ha probado que la solución de la preservación, tal como salino normal, almacenador intermediario de TE, guanidina que contiene de los 2-4M (tal como clorhidrato de la guanidina) se puede también utilizar como reactivo del almacenamiento de la muestra para la preservación de la muestra. El reactivo del almacenamiento de la muestra que contiene la guanidina no se puede adaptar directamente para muestrear el reactivo del lanzamiento manufacturado por Sansure Biotech Inc. para la extracción ácida nucléica. En caso de necesidad, se recomienda para utilizar la extracción o el equipo de la purificación (método magnético) de las gotas (número del ácido nucléico (DNA/RNA) de referencia: S1002E) manufacturado por Sansure Biotech Inc. o el ARN viral Mini Kit (50) de QIAamp manufacturado por QIAGEN para la extracción ácida nucléica.
3. Almacenamiento y entrega de especímenes:
Los especímenes que se probarán se pueden procesar inmediatamente, los especímenes que se probarán en el plazo de 24 horas se pueden almacenar en 4℃. Los especímenes que no se pueden detectar en el plazo de 24 horas se deben almacenar en -70℃ o abajo (en ausencia de condiciones de almacenamiento de -70℃, los especímenes que se probarán se pueden almacenar en -20℃ por 10 días, ácido nucléico se pueden almacenar en -20±5℃ por 15 días). Los ciclos múltiples del helada/del deshielo deben ser evitados. Los especímenes se deben transportar en una jarra congelada sellada con hielo o en una caja sellada de la espuma con hielo. La inactivación de muestras en 56℃ para 30min no afectará a la detección de este equipo.
Control de calidad
El resultado de la prueba se trata como válido si todas las condiciones en el antedicho se cumplen para la misma prueba. Si no el resultado de la prueba se trata como inválido y necesita ser reexaminado.
Gama de referencia
Con la investigación sobre valores de referencia, el valor de referencia del Ct del gen de la blanco se determina para ser 40, el valor de referencia del Ct del control interno se determina ser 40.
Explicación del resultado de la detección
No hay curva típica de la amplificación de la S-forma detectada en el canal de FAM, de ROX y del HEX. (ningún Ct), o el Ct > 40. Se indica que la concentración del espécimen es demasiado baja, o hay las sustancias de interferencia que inhiben la reacción. El resultado de la prueba es inválido. Una investigación se debe realizar para descubrir y para excluir las razones, recoge por favor el espécimen otra vez y reexamina los especímenes.
Almacenamiento y estabilidad
1. El equipo de diagnóstico se debe almacenar en una bolsa sellada at-20±5°C y proteger contra luz. El equipo es provisional válido por 6 meses.
2. Refiera por favor a la fecha de la fecha de la fabricación y de vencimiento en el paquete externo.
3. Los reactivo mantienen válido y estable dentro de la fecha de vencimiento si no utilizó. Mientras el envase del reactivo se abra, el helada/los ciclos del deshielo no debe exceder de tres.
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